四小名助 | 小龙虾等水产品中硝基呋喃类药物的检测

摘要: 有了赛默飞,更要有四小名助。

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又到周五啦!四小名助如约而至,给大家带来色谱耗材相关的实用技术小贴士。内容涉及色谱柱及前处理产品选择、使用、维护保养等内容。实用干货,不容错过!

彭倩

CCS应用团队

新课堂-Classroom

近年来,水产品硝基呋喃类药物残留超标事件屡屡发生,严重威胁着人民身体健康和我国水产品出口贸易。鉴于硝基呋喃类药物残留的严重危害,我国农业部于2002年4月发布193号公告,公布了《食品动物禁用兽药及其他化合物清单》,规定硝基呋喃类抗生素在所有食品动物中禁止使用,2003年又将水产品硝基呋喃代谢物纳入残留监控计划。

目前检测水产品中的硝基呋喃类化合物,可参考的国标是农业部783号公告-1-2006水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法。该方法将样品肌肉组织中残留的硝基呋喃类蛋白结合代谢物在酸性条件下水解,用2-硝基苯甲醛衍生化,然后经乙酸乙酯液液萃取净化后,LC-MS法检测。该方法使用液液萃取提取,操作复杂耗时长,重现性差,回收率不稳定。


本文采用HyperSep Retain PEP SPE小柱进行样品前处理,操作简单、省时、省力,能够得到较高和稳定的回收率。Retain PEP 前处理小柱对于4种硝基呋喃类药物可实现0.05μg/kg的LOQ,远远高于国标方法的0.5μg/kg。回收率在79-110%之间,RSD在3-22%之间。使用Hypersil GOLD C18色谱柱,在LC/MS 上具有出色的峰形和分辨率。


样品前处理

样品提取

2g 样品中加入4mL 水,0.5mL 0.5M HCL, 加入200μL新鲜配制的50mM 邻硝基甲苯的DMSO 衍生液,涡匀1min,在37℃水浴中避光衍生过夜(14-16 小时)。衍生后加入5mL 0.1M K2HPO4,用0.4 M NaOH调整PH到7.0-7.5,混匀后取上清液。

 

SPE操作步骤

60mg 3mL HyperSep Retain PEP 固相萃取柱( 货号:60107-203):

活化

3mL 甲醇,3mL 水

上样

样品,1-2mL/min

清洗

5mL 水,2mL 30% 甲醇的水溶液

洗脱

5mL 乙酸乙酯


仪器条件

色谱条件:

色谱柱 Thermo Scientific Hypersil GOLD C18,5μm,100×2.1mm

货号  25005-102130

流动相

A: 0.5mM 醋酸铵水溶液      

B: 甲醇

梯度

进样量 20μL

流速 250μL/min


质谱条件:

电喷雾电离源(ESI),正离子模式

选择反应监控(SRM)扫描模式

喷雾电压 5000V

离子传输管度 300℃



实验谱图

添加0.05μg/kg 4 种硝基呋喃在小龙虾中的LC/MS 色谱图


实验数据

回收率:4 种硝基呋喃类药物回收率在79%-110%, RSD 在3 到22%(n=3)。

LOQ:AHD,AOZ,SEM,AMOZ 的LOQ 0.05μg/kg。


结论

Retain PEP 前处理小柱对于4种硝基呋喃类药物可实现0.05μg/kg的LOQ,回收率在79-110%之间,RSD在3-22%之间,完全满足农业部783号公告-1-2006水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法方法要求。


应用编号:CCS-SP-034


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